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上海奧析科學儀器紫外可見分光光度計UV1901PC測磷
更新時間:2016-09-14 點擊次數:2501

高分子結合物含置測定法

本法系利用高分子結合物、低分子結合物及游離多糖在

不同乙醇濃度下,沉淀分離,采用紫外-可見分光光度法測

定磷含量,計算髙分子結合物的含量。

試劑 1) 5m o l/L氣化鈉溶液精密稱定氯化鈉

2 9 .2 2 g ,加水溶解并稀釋至1 0 0m l,室溫保存。

(2 )1 .5m o l/L硫酸于1體積98%的硫酸中加人1 1

積的水,混勻。

(3)2. 5%鉬酸銨稱取鉬酸銨2. 65g, 加水溶解并稀釋

100mlo

(4)10%抗壞血酸稱取抗壞血酸10g, 加水溶解并稀

釋至100ml。

(5 )礦化試劑硫酸與70%高氯酸等體積混合制得。

( 6 )產色試劑水、1 .5m o l/L硫酸、2 .5% 鉬酸銨、

10%抗壞血酸,按2 : 1 : 1 : 1體積比混合配制.

(7)8(Vg/ml磷對照品貯備液精密稱定經100°C干燥的

磷酸氫二鈉0. 3665g或磷酸二氫鉀0 .3 5 0 9 g ,加水500ml、

5mol/L硫酸溶液10ml溶解,補加水至1000ml。臨用時,將

貯備液做20倍稀釋,即為磷對照品工作液。

(8 )1 .0m o l/L氫氧化鈉溶液稱取4 g氫氧化鈉,加水

溶解并稀釋至100ml。

供試品溶液的制備(1)分步沉淀原液用生理氯化鈉

溶液稀釋至多糖含量20?2 8 ^ 7 ^ 1或成品疫苗3ml,加人

3120 人血液制品中糖及糖醇測定法

5m o l/L氯化鈉溶液0. 7 5 m l,混勻后加人無水乙酵15ml,于

20X;冰箱放置72?96小時,以每分鐘8000 ^ 4X:離心90

分鐘,吸取上清液為供試品溶液2 ; 于沉淀中加人50%乙醇

溶液0 .5 m l,加玻璃珠,混合后室溫放置1 小時;再加人

50%乙醇溶液1.5ml,混合后室溫放置2 小時,然后以每分

80008°C離心1小時,吸取1. 8m l上清液為供試品溶液

3 ; 沉淀再加人l.O m o l/L氫氧化鈉溶液0.5ml, 混合后室溫

放置1小時,加水1.25ml,作為供試品溶液4。

(2)取多糖含量20?28Mg /m l的原液或成品疫苗1. Oml

為供試品1

(3 )供試品溶液的礦化分別量取1 .0m l供試品1、

1 .5m l供試品溶液20 .7m l供試品溶液3、0 .5m l供試品溶

4 2 份;分別加人礦化試劑0. 1 5 m l,150°C干燥1

時,然后升溫至180X:干燥3 0分鐘,再升溫至250°C干燥1

小時。

測定法量取水1 .9 5 m l,加礦化試劑50^1后加2.0ml

產色試劑,混勻后置37T:水浴2 小時,在波長8 2 5 m n處測

定吸光度,作為空白對照。

于礦化好的供試品溶液中加水1.85ml,加產色試劑

2.0ml,混勻后置37TC水浴2 小時,在波長825nm處測定吸

光度。

分別量取磷對照品工作液0. 1ml、0. 2ml、0. 4ml

0.8ml、1 .0m l于試管中,每管依次加水1. 85ml、1.75ml、

1.55ml、1.15ml0. 95ml;然后每管分別加入礦化試劑

5 0 f i l后加2. Oml產色試劑,混勻后置37°C水浴2 小時,在

波長825nm處測定吸光度。

結果計算以磷對照品溶液的濃度對其相應的吸光度作

直線回歸,求得直線回歸方程。將供試品溶液的吸光度代人

直線回歸方程,求出磷含量。

供試品磷含量(Fg /tn l)分別為:

P ^ C A j X S ) / ! . 0

P2 = CA2 X 18. 75)/l. 5

P3 = (A3X2. 0)/0. 7

P4 = (A t X 2. 0)/0. 5 - (P s X10)/100

試驗有效性8 0% </ ( 2+ + 尺)<120%

供試品高分子結合物含量(%) = P 4/ ( + P 3 + P , ) X 100

供試品游離多糖含量( ) = [1 / (P2 + P 3 + P 4) ] X 100

式中 f V P2, P3、P4 為供試品1,供試品溶液2,

供試品溶液3 , 供試品溶液4 的磷含量;A A 2、A 3、A,

為供試品1 , 供試品2 , 供試品3 , 供試品4 中取樣礦化后的

磷含量。

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